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  2013年10月,我所承担的山东省中青年科学家奖励基金计划项目“鱼类迟钝爱德华氏菌中草药多糖型微胶囊重组亚单位疫苗的研制”已按计划完成各项考核指标。项目共发表论文3篇,申请国家发明专利1项。
  迟钝爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)是一种水产动物重要的致病菌,可以感染包括淡水与海水养殖的多种鱼类,并能在短期内引起大量死亡,给我国水产养殖业带来了巨大经济损失。而疫苗的使用可提高养殖鱼类特异性免疫水平,使鱼体产生抵抗特定病原微生物感染的免疫力,不污染环境,无药物残留等问题,是鱼类疾病防控的主流发展方向。本项目构建了迟钝爱德华氏菌的甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、外膜蛋白(ompW)及鞭毛蛋白(fliC)的原核表达载体,并进行了体外表达和纯化,利用碳化二亚胺法将重组蛋白与迟钝爱德华氏菌脂多糖偶联,然后与黄芪多糖混合,采用锐孔凝固浴法制备出海藻酸钙—壳聚糖微胶囊疫苗。免疫保护性实验结果显示,本项目研制的迟钝爱德华氏菌多糖型亚单位口服微胶囊疫苗对牙鲆的相对免疫保护率为81.6%。同时,本项目研究了脂多糖和黄芪多糖对重组亚单位疫苗的免疫促进效果,结果显示脂多糖和黄芪多糖作为疫苗免疫刺激剂使用,可显著增强鱼体的免疫应答水平,提高特异性抗体效价,上调涉及特异性与非特异性免疫相关基因的表达,最终表现出较高的抗迟钝爱德华氏菌感染能力。
  本项目将迟钝爱德华氏菌3种免疫相关蛋白与细菌脂多糖进行偶联,并通过优配重组蛋白-脂多糖产物,构建了最佳的混合重组亚单位疫苗,能显著提高亚单位疫苗的免疫保护效果,解决传统亚单位疫苗组分单一,免疫保护力相对较低的问题;同时研究了中草药多糖对迟钝爱德华氏菌疫苗的免疫促进作用,发现多糖能提高鱼体的基础免疫力,提高疫苗保护效果,为中草药多糖作为水产疫苗佐剂在渔用疫苗研制中的应用,提供了基础材料;另外本项目应用微胶囊技术,制备了中草药多糖型微胶囊重组亚单位疫苗,能够克服口服疫苗吸收差、免疫保护效果不显著的缺点,最终获得能够在实际生产中推广使用的高效、安全、稳定的新型疫苗,具有良好的开发应用前景。
 
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